Negatieve kleuring protocol voor transmissie elektronenmicroscopie

Chemie Admin Oktober 23, 2016 0 22
FONT SIZE:
fontsize_dec
fontsize_inc

Biochemie, Moleculaire Biologie en Celbiologie protocollen >> negatieve kleuring protocol voor transmissie elektronenmicroscopie

Lees de veiligheid van de materialen en technische specificaties en het product beschrijving van alle materialen die u wilt gebruiken voordat u een van deze materialen, en volgt u de juiste richtlijnen voor het EU-veiligheidsrichtlijnen.

Bereiding van de roosters

1. Vul een grote schaal (bijvoorbeeld 25 cm diameter) met gedestilleerd water.
2. Met behulp van een stuk papier voor microscopie lenzen, verwijdert stof op het oppervlak van het bad.
3. Plaats een daling van 2% parlodion (in amyl acetaat) [moet je in staat om 2% parlodion kopen in amylacetaat] water. Probeer niet om de stoom inhaleren van parlodion.
4. Wacht een paar minuten voor de parlodion te verspreiden.
5. Het gebruik van een zeer dunne tang geschikt voor het beheer van het netwerk, de netten alleen aan hun randen beheren en plaats het koolstofatoom roosters (kan worden gekocht bij Ted Pella, 200 maaswijdte veelal geschikt) aan weerszijden van het licht up of donkere kant naar boven op parlodion. Wees consistent bij het gebruik van beide kanten lichte of donkere kant aan alle andere netwerken. Probeer om de planken niet te dicht bij de rand of het midden van parlodion plaatsen. Het centrum van de parlodion het algemeen te dik en de rand van parlodion algemeen te dun. Wees voorzichtig met een tang, omdat ze zijn erg scherp. Ook heel voorzichtig zijn wanneer u de pincet op te slaan en het zetten van de achterklep op het puntje van de pincet.
6. Zet ongeveer 16-20 redelijk dicht grids met elkaar in de vorm van een 4x4 of 4x5-model.
7. Plaats een stuk papier voor microscopie lenzen gesneden om de juiste maat die past in een 4x4 of 4x5 model.
8. Met een pincet, zorgvuldig snijd de sectie parlodion met het rooster papier en de lens.
9. droging 's nachts in een petrischaal, met het deksel van de Petri plaat half open en sommige Whatman filter papier in de bodem van de petrischaal.
10. Carbon vacht van de grills de volgende dag of later een carbon coating units. (Vraagt ​​iemand om te laten zien hoe de carbon vacht units te gebruiken. In het algemeen, het positioneren van de lens papier roosters in de vacuümkamer bevat, het verlagen van het vacuüm voldoende, en dan jas met carbon 8-10 seconden .)
11. Spoel de kom met alleen gedistilleerd water, laten drogen, en zet weg - gebruik de kom voor het enige doel van de voorbereiding van de netten.

negatieve kleuring

1. Snij cirkelvormige Whatman filtreerpapier in stukken in de vorm van een wig vergelijkbare cake snijden. Putting deze gesneden stukken filtreerpapier in een petrischaal. Zij worden gebruikt om de vloeistof te drogen op de rekken.
2. Wanneer u de negatieve kleuring lopen, proberen ervoor te zorgen dat alle oplossingen zijn zo fris en schoon mogelijk.
3. Geniet van het monster door de roosters: Met behulp van fijne tang, pak een koolstof beklede rooster gezicht tot aan de grens Grid. Met het stuk rubber dat wordt gebruikt om de klemmen elkaar vergrendelen, schuift de klem, zodat de klemmen die het rooster op een veilige manier. Indien de pincet zijn voorzien van een stuk rubber samen te scherpen, kan het mogelijk zijn om ongeveer 0,75 cm gesneden uit een dergelijk stuk rubber slang die relatief moeilijk om de juiste diameter van de pincet. Bewegende praktijk of wiebelen het rubber stuk op en neer op de pincet te helpen los te maken van een beetje 'rubber. Wees zeer voorzichtig dat de punt van de pincet punten van u en uw hand om jezelf te voorkomen vast komen te zitten. Plaats het uiteinde van de tang met Ophangsysteem met de punt van de tang rust zacht op het deksel van een petrischaal. Breng 5 ul van het monster te kleuren negatief op de grill en wacht vijf minuten.
4. Tijdens het wachten op de adsorptie neemt 0,5 ml 2% uranylacetaat (in water) en verdund in 0,5 ml water. Spin down bij 4 ° C gedurende 5 minuten. Verwijder de bovenkant van 0,5 ml voor later gebruik. (2% uranylacetaat moet worden gekoeld om te beschermen tegen licht.)
Oplossing van uranyl acetaat worden afgewogen en gemengd in de kap. U dient de oplossing op een hete plaat te verwarmen als het beweegt om het poeder uranylacetaat ontbinden. Het moet ook de uranylacetaat oplossing in staat om af te koelen voordat u deze uit de kap.
5. Verwijder de vloeistof met partjes Whatman filter papier.
6. Was tweemaal met PBS voor elke minuut, waardoor zowel 5 ul van PBS op het rooster of raster van 2 druppels 5 ul PBS elk aangebracht op een stuk parafilm omkeren.
7. Breng 5 ul van 1% uranylacetaat op de grid voor de 10 seconden, verwijder met Whatman filter papier en breng daarna nog eens 5 ul van 1% uranylacetaat gedurende 50 seconden.
8. Plaats het rooster op een netwerkondersteuning elektronenmicroscopie netwerken (kan worden gekocht bij Ted Pella).
9. Krijg training over hoe je een bepaalde transmissie-elektronenmicroscoop te gebruiken en onderzoekt de monsters die negatief werden gekleurd.

Copyright 2006-2015 door Biologicalworld.com Disclaimer Privacy Policy


(0)
(0)